Diagnóstico de endoftalmitis por método microbiológico convencional y molecular en pacientes de centros oftalmológicos de Paraguay Translated title: Diagnosis of endophthalmitis by molecular and conventional microbiological methods in patients from ophthalmologic centers of Paraguay

Abstract

RESUMEN La endoftalmitis infecciosa es una condición intraocular grave, aunque poco frecuente, que puede llevar a la pérdida de la visión. El diagnóstico etiológico precoz y el tratamiento adecuado llevan a una mejor evolución. Las técnicas microbiológicas convencionales tienen baja sensibilidad en el diagnóstico de la endoftalmitis infecciosa, en cambio la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método de mayor sensibilidad que está siendo utilizado ampliamente. El objetivo fue determinar por cultivo y PCR la etiología de la endoftalmitis infecciosa en pacientes que consultaron en centros oftalmológicos de Paraguay. Se estudiaron muestras de humor vítreo obtenidas por punción de 51 pacientes con endoftalmitis. La muestra se dividió en dos alícuotas; una para el estudio microbiológico convencional y la otra para la PCR anidada. Esta última utiliza un par de cebadores basado en secuencias conservadas del gen 16S ribosomal y cebadores específicos para bacterias gram positivas. Se estandarizó la PCR logrando una sensibilidad de detección de 3.10-5 ng/µl para S. aureus, 2,5.10-3 ng/µl para S. pneumoniae y 6.10-7 ng/µl para E. coli. De las 51 muestras, 12 (23,5%) fueron positivas por métodos microbiológicos convencionales y 26 (51,0%) por la PCR anidada. Por cultivo se identificaron predominantemente bacterias grampositivas 8/11 (73%) y un aislado de hongo filamentoso. La PCR anidada presentó muy buena sensibilidad y de gran utilidad en la identificación del origen bacteriano de la endoftalmitis, mejorando la sensibilidad del cultivo en 27,5%. La discriminación bacteriana en grampositivos y gramnegativos por la PCR se correlacionó con el cultivo en el 100% de los casos.

Translated abstract

ABSTRACT Infectious endophthalmitis is a serious intraocular condition, although it is rare, often results in vision loss. The early etiological diagnosis and appropriate treatment leads to a better outcome. Conventional microbiological techniques have low sensitivity in the diagnosis of infectious endophthalmitis, however polymerase chain reaction (PCR) is a more sensitive method which is widely used. The goal was to determine the etiology of infectious endophthalmitis by culture and PCR in patients who consulted in ophthalmologic centers in Asunción, Paraguay. Vitreous fluid samples obtained by puncture from 51 patients with endophthalmitis were studied. Samples were divided into two aliquots; one was used for the conventional microbiological study and the other for the nested PCR. The latter uses a pair of primers based on conserved sequences of the 16S gene ribosomal and specific primers for gram positive bacteria. Detection sensitivity of the nested PCR was 3.10-5 ng / μl for S. aureus, 2.5.10-3 ng / μl for S. pneumoniae and 6.10-7 ng / μl for E. coli. Out of 51 samples, 12 (23.5%) were positive for conventional microbiological methods and 26 (51.0%) by nested-PCR. Gram-positive bacteria were predominant 8/11 (73%) by culture and one filamentous fungus was isolated. The nested PCR presented very good sensitivity and very useful for the identification of the bacterial origin of endophthalmitis, improving culture sensitivity in 27.5%. Bacterial discrimination in Gram positive and Gram negative by PCR correlated 100% with the culture.