Inmunolocalización hepática de CYP P450 en un experimento de toxicidad subaguda por Clorpirifos 0,0-dietil 0-(3, 5, 6-tricloro-2-piridil fosforotioato) en machos juveniles de tilapia Oreochromis spp) Translated title: Inmunolocalização hepática de CYP P450 num teste de toxicidade subaguda por Clorpirifos 0,0-dietil 0-(3, 5, 6-tricloro-2-piridil fosforotioato) em machos juvenis de tilápia (Oreochromis spp.) Translated title: Liver immunolocation of CYP P450 in an subacute toxicity experiment with Clorpirifos o,o-(3, 5, 6- trichloride -2-pyridyl phosphorotioato in young male tilapia (Oreochromis spp)

Abstract

Resumen En Colombia son escasas las técnicas de diagnóstico implementadas con biomarcadores inmunohistoquímicos para realizar biomonitoreo de contaminación ambiental. Objetivo: Implementar una técnica inmunohistoquímica para inmunolocalizar CYP 1A en tejidos de peces, luego de realizar un experimento de exposición subaguda al Clorpirifos en tilapias juveniles machos. Métodos: el experimento de dosis subletal, se realizó en un sistema semiestático, con recambio diario del 50% del volumen de agua manteniendo la concentración correspondiente en cada grupo experimental mediante la adición de la mitad de la dosis hasta el día 28. Las concentraciones de Clorpirifos para la exposición fueron 4, 8, y 12 μg/L, en los grupos tratados y 0,0 μg/L en el grupo control. Se tomaron muestras para estudio histopatológico e inmunohistoquímico. Resultados: se encontró diferencia significativa (p<0,05) para algunas lesiones en el hígado, confirmando que este es un órgano de impacto de los efectos del Clorpirifos a bajas dosis. Se verificó la inducción de CYP 1A en el hepatocitos, endotelio y células biliares tanto de los animales expuestos como en los no expuestos. Desde el punto de vista multidimensional no se encontró diferencia estadística entre los tratamientos para las variables estudiadas. Conclusión: se implementó y normalizó una técnica de inmunohistoquímica para la inmunolocalización tisular de CYP 1A, que podrá utilizarse en futuras investigaciones para realizar biomonitoreo de contaminación en las cuencas hidrográficas de Colombia.

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Resumo Na Colômbia são escassas as técnicas de diagnóstico realizadas com biomarcadores imuno-histoquímicos para realizar biomonitoramento da contaminação ambiental. Objetivo: Estandardizar uma técnica imuno-histoquímica para fazer imunolocalização do CYP 1ª em tecidos de peixes, logo de realizar um experimento de exposição subaguda ao Clorpirifós em machos juvenis de tilápia. Métodos: O teste da dose subletal realizou-se num sistema semiestático, com recambio diário de 50% do volume de água mantendo a concentração correspondente em cada grupo experimental mediante a adição da metade da dose até o dia 28. As concentrações de Clorpirifós para a exposição dos peixes foram 4, 8 e 12 μg/L, nos grupos tratados e 0,0 μg/L no grupo controle. Tomaram-se amostras para o estudo histopatológico e imuno-histoquímico. Resultados: Encontrou-se diferença significativa (p<0.05) para lesões no fígado, confirmando que este é um órgão que recebe diretamente o impacto dos efeitos do Clorpirifos em baixas doses. Verificou-se a indução de CYP 1A nos hepatócitos, endotélio e células biliares tanto nos animais que estiveram expostos ao Clorpirifós quanto nos animais que não estiveram expostos. Desde o ponto de vista multidimensional não se encontrou diferença estadística entre os tratamentos para as variáveis estudadas. Conclusão: Estandardizou-se e normalizou-se uma técnica de imuno-histoquímica para a imunolocalização tissular de CYP 1A, que poderá se utilizada em futuras pesquisas para realizar biomonitoramento da contaminação das bacias hidrográficas da Colômbia, além disto.

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Abstract In Colombia the diagnostic techniques for implementing immunohistochemical biomarkers to fulfill biomonitoring of environmental contamination are limited. Objective: To implement an immunohistochemical technique to immunolocate CYP 1A in the tissue of fish, performing a subacute exposition experiment of Clofopirifos in the liver of young male tilapia. Methods: the sublethal dosage was carried out in semi-static state, with a daily refill of 50% of the water volume, maintaining the corresponding concentration in each group through the addition of half of the dosage until the 28th day. The Cloropirifos concentrations for the exposition were 4, 8, and 12 μg/L in the treated groups and 0.0 μg/L in the control group. Samples were taken for histopathological and immunohistochemical study. Results: A significant difference (p<0.05) for some liver lesions, confirming that it is an organ affected by low dosages of Cloropirifos. It verified that the induction of CYP 1A in hepatocyte, endothelium and biliary cells equally in exposed animals and those that weren't exposed. From a multidimensional perspective, no statistical difference was found between the treatments for the variables under study. Conclusion: this study implemented and normalized an immunohistochemical technique for the tissue immunolocation of CYP 1A that could be used in future investigations to fulfill biomonitoring of contamination in Colombia's hydrographic basins.