Detection of transgenic events in maize using immunochromatographic strip test and conventional PCR Translated title: Detecção de eventos transgênicos em milho utilizando tiras imunocromatográficas e PCR convencional

Abstract

With the growth in the transgenic market, fast and economically viable methodologies are necessary for undertaking transgene detection tests, both for identification of contamination in seeds and in grain. Seeds from commercial conventional GNZ 2004, and transgenic VT-Pro (MON89034), Roundup Ready (NK603) and Herculex (TC1507) maize cultivars were used. In order to simulate different levels of contamination, the transgenic seeds were mixed with conventional seeds at levels of 0.2%, 0.4%, 1.0% and 1.6% for VT-Pro, and 0.2%, 0.5%, 0.8% and 1.2% for Roundup Ready and Herculex. The lateral flow membrane strip test was performed in the whole seed, endosperm and embryo. For evaluation of the specificity of the technique in detection of the TC1507 event by means of the conventional PCR technique, seeds of the commercial maize hybrid GNZ 2004 were used as negative control, and the maize hybrid 2B655Hx as positive control. In order to simulate different levels of contamination, transgenic seeds were mixed with conventional seeds at the levels of 10%, 5%, 1%, 0.5% and 0.1%. Seeds from each sample were crushed, and then DNA extraction was performed by the CTAB 2% method. Using the immunochromatographic strip, it was possible to evaluate the expression of proteins related to the VT-Pro, Roundup Ready and Herculex events when whole seeds were used at the 0.2% level of contamination, whereas by the conventional PCR technique, it was possible to detect the TC1507 event in samples with 1% contamination.

Translated abstract

Com o crescimento do mercado de transgênicos, fazem-se necessárias metodologias rápidas e economicamente viáveis para detecção de transgenes, tanto para a identificação de contaminação em sementes quanto em grãos. Foram utilizadas sementes de cultivares comerciais de milho GNZ 2004 convencional, VT-Pro (MON89034), Round up Ready - RR (NK603) e Herculex (TC1507). Afim de simular diferentes níveis de contaminação, sementes transgênicas foram misturadas às sementes convencionais, nos níveis de 0,2%, 0,4%, 1,0% e 1,6%, para VT-Pro e 0,2%, 0,5%, 0,8% e 1,2%, para RR e Herculex. O teste de tiras foi realizado em semente inteira, endosperma e embrião. Para a avaliação da especificidade da técnica na detecção do evento TC1507, por meio da técnica de PCR convencional, foram utilizadas, como controle negativo, sementes do híbrido comercial de milho GNZ 2004 e, como controle positivo, o híbrido de milho 2B655Hx. Com a finalidade de simular diferentes níveis de contaminação, sementes transgênicas (TC1507) foram misturadas às sementes convencionais, nos níveis de 10%, 5%, 1%, 0,5% e 0,1%. Sementes de cada amostra foram trituradas e foi realizada a extração do DNA pelo método CTAB 2%. Utilizando-se a tira imunocromatográfica, foi possível avaliar a expressão de proteínas referente aos eventos VT-Pro, RR e Herculex, quando da utilização de sementes inteiras com níveis de contaminação de 0,2%. Foi possível, pela técnica de PCR convencional, detectar o evento TC1507, em amostras com 1% de contaminação.