Purificación y caracterización de un nuevo principio coagulante del veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus Translated title: Purification and characterization of a new coagulant principle from the venom of Bothrops pictus peruvian snake

Abstract

Se ha purificado una proteína coagulante del tipo enzima similar a trombina, del veneno de la serpiente peruana Bothrops pictus mediante dos pasos cromatográficos, sobre Sephadex G-100 SF y CM-Sephadex C-50, en ambos casos utilizando buffer acetato de amonio 0,05M pH 6,0. La enzima fue purificada 18 veces con un rendimiento de 40,74% y por PAGE- SDS se obtuvo una sola banda proteica de 54,4 kDa en condiciones reductoras con 2 β-mercaptoetanol y de 45,4 kDa en condiciones no reductoras, por lo que se estableciσ que la enzima consta de una sola cadena polipeptνdica con al menos un enlace disulfuro. La enzima coagulante mostrσ tener actividad sobre fibrinσgeno bovino así como sobre el substrato cromogénico BApNA; siendo inhibida por heparina y por el inhibidor de serinoproteasa PMSF. La enzima registró un pH óptimo de 8,0 para su actividad amidolítica. Los ensayos térmicos mostraron que es estable hasta los 50 °C. El ion Mn2+, a una concentración final de 10mM, es un potente activador de la enzima, mientras que Ca2+ y Mg2+ no muestran efecto significativo.

Translated abstract

A coagulant protein called trombin like enzyme, was purified from the venom of the Bothrops pictus peruvian snake, using two chromatographic steps: Sephadex G-100 SF and CM Sephadex C-50, equilibrated with 0,05 M ammonium acetate buffer pH 6,0. The enzyme was purified 18 folds with 40,74% of yield and the PAGE-SDS analysis showed an unit protein band with 45,4 kDa and of 54,4 kDa under no reducing and reducing s. Thus it is a single polypeptide chain with at least a S-S bond. The enzyme was capable to clot bovine fibrinogen and attack BApNA chromogenic substrate; being an inhibitor agent as well as PMSF serinoprotease inhibitor. It had a 8,0 as optimum pH on BApNA and it was stable until 50 °C. Mn2+ ion (10 mM) was a activator instead.