ESTUDIOS ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE UNA LECTINA AISLADA DE SEMILLAS DE CAESALPINIA SPINOSA KUNTZE (TARA) Translated title: STRUCTURE AND FUNCTION STUDIES OF A LECTIN FROM CAESALPINIA SPINOSA KUNTZE (TARA) SEEDS

Abstract

Una lectina de semillas de Caesalpinia spinosa Kuntze (Tara; Caesalpiniaceae, Leguminosae) fue purificada y caracterizada a través de extracción salina, por combinación de dos cromatografías de exclusión molecular y HPLC de fase reversa. El análisis en SDS-PAGE demostró que la lectina purificada era homogénea ya que ésta presentó una sola banda de proteína correspondiente a un tamaño molecular de 29 kDa. La lectina de Caesalpinia spinosa Kuntze (CsLEC) fue capaz de aglutinar eritrocitos del grupo sanguíneo humano "B" Rh+ con una CMH de 3,86 µg/ml y esta actividad fue inhibida por D-glucosa, D-manosa, D-maltosa, D-glucosamina, N-acetil glucosamina (3,25 mM) y el agente quelante EDTA (0,31 mM), lo que sugiere que puede ser considerada como una lectina tipo C que depende de iones divalentes como calcio y manganeso. El análisis completo de aminoácidos reveló que CsLEC es ácida y sumamente hidrofóbica (16,3% residuos ácidos, 8,9% básicos, 17,0% neutros y 57,8% residuos hibrofóbicos), prevaleciendo la fenilalanina (Phe, 22,1%). Comparación de la secuencia aminoacídica con otras secuencias de vegetales determinó que CsLEC tiene homología con lectinas de la familia Leguminosae, mostrando una semejanza del 67,9% con la leucoaglutinina de Maackia amurensis (Fabaceae, Papilionoideae) con sialillactosa y el precursor de la lectina de Maackia amurensis.

Translated abstract

A lectin from Caesalpinia spinosa Kuntze (tara; Caesalpiniaceae, Leguminosae) seeds was purified and characterized through saline extraction by the combination of two size-exclusion chromatographies and a reverse phase HPLC. The SDS-PAGE analysis demonstrated that the purified lectin was homogeneous since it presented a single protein band corresponding to a molecular size of 29 kDa. The lectin from Caesalpinia spinosa Kuntze (CsLEC) was able to agglutinate human blood group "B" Rh+ erythrocytes with a CMH of 3.86 µg/ml. This activity was inhibited by D-glucose, D-maltose, D-mannose, D-glucosamine, N-acetyl glucosamine (3.25 mM) and the chelanting agent EDTA (0.31 mM), suggesting that it can be considered as a type C lectin, which depend on divalent ions such as calcium or manganese. The complete amino acid analysis revealed that the CsLEC is acidic and highly hydrophobic (16.3 % acid , 8.9 % basic, 17.0 % neutral and 57.8 % hydrophobic residues), prevailing phenylalanin (Phe, 22.1 %). Amino acid sequence comparison with other plant lectins determined that it has more homology with the lectins from the Leguminosae family, showing 67.9 % similarity with the leucoagglutinin from Maackia amurensis (Fabaceae, Papilionoideae) with sialillactose and the predecessor of the lectin from Maackia amurensis.