Neutralización por reducción en placas como método específico para el Diagnóstico Serológico de Fiebre Amarilla

Abstract

Objetivos: Estudiar la capacidad neutralizante de muestras séricas humanas para ser empleada como prueba de confirmación frente a otras técnicas y evaluar la relación de neutralización en diferentes poblaciones para cepas de FA: 287-78 (nativa) y 17D (referencial). Materiales y métodos: Se empleó la cepa 17D para la estandarización de la prueba en células VERO utilizando dos métodos (sólido y semi-líquido); además, se seleccionaron muestras séricas humanas en base al antecedente vacunal (presente o ausente), a la procedencia (endémica y no endémica) y la positividad a virus del dengue, las cuáles fueron evaluadas por ELISA. Las poblaciones seleccionadas se enfrentaron por la prueba estandarizada (PRNT) frente a las cepas de FA: 17D (cepa vacunal derivada del prototipo Asibi) y 287-78 (primer aislamiento de FA del Instituto Nacional de Salud del Perú). Resultados: Se obtuvieron buenos resultados con el método semi-líquido, siendo el séptimo día el óptimo de coloración de las placas. De los cuatro grupos seleccionados, tres fueron positivos por ELISA y los resultados por PRNT fueron para la suspensión 17D, 29 negativos y 67 positivos con títulos entre 1:10 y 1:2560; y para la cepa 287-78, 17 negativos y 79 positivos con títulos entre 1:10 y 1:2560. Conclusiones: La técnica semi-líquida con tiempo de coloración al séptimo día ofrece óptimos resultados en plaqueo y neutralización. Además, el ELISA resultó ser menos específico frente al PRNT y se encontró variación en relación a títulos y capacidad neutralizante en algunos sueros para ambas cepas.

Translated abstract

Objectives: To study the neutralizing capability of human serum samples in order to be used as a confirmation test compared to other techniques, and to assess the neutralization relationship in different populations for 287-78 (native) and 17D (referential) YF strains. Materials and methods: The 17D strain was used to standardize the test in VERO cells using two methods (solid and semi-liquid). Additionally, human serum samples selected on the basis of having received YF vaccine (yes/no), their origin, and being positive for Dengue virus, and these samples were assessed using an ELISA. The selected populations were confronted using the standardized test (PRNT) with YF 17D strains (vaccinal strain derived from the Asebi prototype) and with YF 287-78 (the first YF strain isolated by the Peruvian National Institute of Health). Results: Accurate results were obtained with the semi-liquid technique, the seventh day was the optimum time for plate staining. Three of the four selected groups were positive for ELISA. The findings for PRNT were: using YF 17D strain, 29 negatives and 67 positives, with titers between 1:10 and 1:2560; and for YF 287-78, 17 negatives and 79 positive, with titers between 1:10 and 1:2560. Conclusions: The semi-liquid technique with the staining time at the seventh day showed up optimal results for plating and neutralization. Additionally, the ELISA method turned out to be less specific compared to PRNT and variations related to titers and neutralizing capability in some sera for both strains were detected.