Composición química, actividad antioxidante, antiinflamatoria y antiproliferativa del extracto de callos derivado de Acalypha californica Bentham Translated title: Chemical composition, antioxidant, antiinflammatory and antiproliferative activity of callus extract derived from Acalypha californica Bentham

Abstract

Resumen Acalypha californica Bentham es una planta utilizada por los grupos étnicos de Sonora para tratar el cáncer; sin embargo, es una planta que no es cultivada, de manera tal que la especie crece en hábitats expuestos a las actividades antropogénicas y la colecta indiscriminada, resultando en la disminución significativa de las poblaciones silvestres. Aunado a lo anterior las actividades biológicas relacionadas con los procesos antiproliferativos (antioxidante y antiinflamatoria) atribuidos a la especie no han sido evaluadas. Por lo que el objetivo del presente trabajo fue establecer las condiciones adecuadas para el crecimiento de callos de A. californica, así como caracterizar química y biológicamente el extracto etanólico de los callos generados. Primeramente, para producción de callos se utilizaron explantes a partir de hojas, pecíolos, yemas y segmentos nodales de A. californica los que fueron inoculados en Woody Plant Medium (WPM), suplementado con ácido indol butírico (AIB), bencil amino purina (BAP) o cinetina (CIN) en un intervalo de 0.5-2.0 mg/L. El extracto de los callos liofilizados fue generado por maceración con etanol al 70% y la actividad antiproliferativa del mismo se midió mediante el ensayo MTT en las líneas celulares cancerosas humanas A549, HeLa y MCF-7. La actividad antioxidante se evaluó empleando los ensayos DPPH, FRAP y midiendo el contenido de fenoles y flavonoides totales (TPC y TFC). La actividad antiinflamatoria fue estimada a través de la capacidad inhibitoria del óxido nítrico en macrófagos RAW264.7 estimulados con LPS. Finalmente se generó un perfil químico de los compuestos presentes en el extracto etanólico de los callos utilizando espectrometría de masas. Resultando que las yemas fueron el explante más callogénico, con un 55.60 % de inducción en la concentración de 1.5 mg/L de AIB. En tanto que el extracto etanólico de callos de A. californica no mostró una actividad significativa sobre las líneas celulares probadas; sin embargo, presentó un gran contenido de TPC y TFC con valores de 2.6±0.25 mmol GAE/g de extracto y 1.56±0.25 mmol QE/g de extracto; así como una actividad antioxidante significativamente alta por el método de estabilización del radical DPPH (EC50 44.85±1.22 (g/mL) y FRAP (1.58±0.15 mmol de Fe2+ /g de extracto). El extracto etanólico de los callos de A. californica inhibió en un 24% la producción de óxido nítrico con respecto a las células control. En el perfil químico del extracto etanólico de los callos se encontraron estructuras pertenecientes a los ácidos fenólicos y flavonoides principalmente. De esta manera se concluyó que para desarrollar callos efectivos de A. californica las yemas de la planta deben ser cultivadas en WPM+1.5 mg/L de AIB. Adicionalmente se concluye que los compuestos fenólicos son los responsables de la alta actividad antioxidante y antiinflamatoria presentada por el extracto etanólico de los callos obtenidos.

Translated abstract

Abstract Acalypha californica Bentham is a plant used by the ethnic groups of Sonora to treat cancer; however, it is a plant that is not cultivated, in such a way that the species grows in habitats exposed to anthropogenic activities and indiscriminate collection, resulting in a significant decrease in wild populations. In addition to the above, the biological activities related to the antiproliferative processes (antioxidant and anti-inflammatory) attributed to the species have not been evaluated. Therefore, the objective of the present work was to establish the adequate conditions for the growth of A. californica calluses, as well as to characterize chemically and biologically the ethanolic extract of the generated calluses. First, for callus production, explants were used from leaves, petioles, buds, and nodal segments of A. californica, which were inoculated in Woody Plant Medium (WPM), supplemented with indole butyric acid (AIB), benzyl amino purine (BAP) or kinetin (CIN) in a range of 0.5-2.0 mg/L. The lyophilized callus extract was generated by maceration with 70% ethanol and its antiproliferative activity was measured by the MTT assay in the human cancer cell lines A549, HeLa and MCF-7. The antioxidant activity was evaluated using the DPPH and FRAP assays and by measuring the content of total phenols and flavonoids (TPC and TFC). The antiinflammatory activity was estimated through the inhibitory capacity of nitric oxide in RAW264.7 macrophages stimulated with LPS. Finally, a chemical profile of the compounds presents in the ethanolic extract of the callus was generated using mass spectrometry. Resulting that the buds were the most callogenic explant, with a 55.60% induction in the concentration of 1.5 mg/L of AIB. While the ethanolic extract of A. californica calluses did not show significant activity on the cell lines tested; however, it presented a high content of TPC and TFC with values of 2.6±0.25 mmol GAE/g of extract and 1.56±0.25 mmol QE/g of extract; as well as a significantly high antioxidant activity by the DPPH radical stabilization method (EC50 44.85±1.22 (g/mL) and FRAP (1.58±0.15 mmol of Fe2+/g of extract). The ethanolic extract from A. californica calluses inhibited nitric oxide production by 24% compared to control cells. In the chemical profile of the ethanolic extract of the calluses, structures belonging to phenolic acids and flavonoids were found mainly. In this way, it was concluded that to develop effective calluses of A. californica, the buds of the plant must be cultivated in WPM+1.5 mg/L of AIB. Additionally, it is concluded that phenolic compounds are responsible for the high antioxidant and antiinflammatory activity presented by the ethanolic extract of the calluses obtained.