Characterization of the IVS17bTA microsatellite marker and six CTFR gene mutations in 21 Cuban families with cystic fibrosis Translated title: Caracterización del marcador microsatélite IVS17bTA y seis mutaciones del gen CFTR en 21 familias cubanas con fibrosis quística

Abstract

Cystic fibrosis is an autosomal recessive disease. Its incidence in Cuba is 1 in 5000 live births. The molecular cause underlying this disease is related to mutations in the regulatory gene encoding the cystic fibrosis transmembrane regulator (CFTR). In this study, the techniques for the study of IVS17bTA microsatellite marker were standardized, and the most frequent mutations in the CFTR gene were also detected for 21 Cuban families. Polymerase chain reaction, agarose and polyacrylamide (plus silver staining) gel electrophoresis techniques were used for both, identification of mutations and microsatellite standardization. Among the 22 Cuban patients, seven were found homozygous, four compound heterozygous and 11 with a single mutation so, 33 chromosomes were molecularly characterized for the 75 %. Twelve allelic variants were found for the IVS17bTA microsatellite; alleles 31 and 7 the most frequent ones. Alleles 31 and 46 were associated to the F508del and R334W mutations, respectively. Among the 21 families, 18 were completely informative for the IVS17bTA microsatellite marker, accounting for 85.7 %. This study helped to complete the diagnosis in those patients in which the responsible mutations in one or both chromosomes had not yet been identified. Besides, we were also able to identify mutations associated with different alleles of the marker without gene sequencing, also helping to decrease the cost of screening.

Translated abstract

La fibrosis quística es una enfermedad autosómica recesiva. Su incidencia en Cuba es de 1 de cada 5000 recién nacidos vivos. La causa molecular que provoca esta enfermedad son las mutaciones en el gen regulador transmembranal de la fibrosis quística (CFTR). En este estudio se detectaron las mutaciones más frecuentes en 21 familias cubanas y se estandarizaron las técnicas para el estudio del marcador microsatélite IVS17bTA, lo cual constituyó nuestro objetivo principal. Para la identificación de estas mutaciones y la estandarización del microsatélite, se emplearon las técnicas de reacción en cadena de la polimerasa y electroforesis en geles de agarosa y poliacrilamida (tinción con plata). De los 22 pacientes, se encontraron 7 homocigóticos, 4 heterocigóticos compuestos y 11 con una sola mutación, por lo que se caracterizaron molecularmente 33 cromosomas, lo que representa el 75 %. En el estudio del microsatélite IVS17bTA se encontraron 12 variantes alélicas, los alelos más frecuentes fueron el 31 y el 7. El alelo asociado a la mutación F508del fue el 31 y a la mutación R334W fue el 46. De las 21 familias analizadas, 18 resultaron completamente informativas para el marcador, lo que representa el 85.7 % Este estudio ha ayudado a completar aún más el diagnóstico en los pacientes en los que aún no se han identificado las mutaciones responsables en ambos cromosomas o en uno de ellos. Además se han podido identificar mutaciones asociadas a diferentes alelos del marcador, sin necesidad de secuenciar el gen, lo que aumentaría el costo.